Home » Column Manufacturer M to Z » PolyLC BioChromatography » PolyLC Biochromatographie Säulen

PolyLC Biochromatographie Säulen

Wir vertreten PolyLC Biochromatographie Säulen im deutsch sprechenden Ländern mit deutsch sprechendem technischen Service.

Click to english page
Click to english page

Die Produktpalette umfasst

Klicken Sie die Produktnamen für detaillierte Erklährung und Offerten

1. PolyGLYCOPLEX  für komplexe Kohlenhydrate
2. PolyCAT A- a.für den Kationenaustausch von Proteinen, b. Hydrophile Interaktionschromatographie (HILIC), c. Größenausschlusschromatographie (SEC)
3. PolySULFOETHYL Aspartamide- für den Kationenaustausch von Peptiden
4. PolyPROPYL-, PolyETHYL-, PolyMETHYL-Aspartamid- für die hydrophobe Interaktionschromatographie (HIC) von Proteinen und Peptiden
5. PolyBUTYL-, PolyPENTYL-, PolyHEXYL-, PolyHEPTYL-, PolyOCTYL-, PolyNONYL-, PolyDECYL-Aspartamid für a. HIC-MS in der Top-down-Proteomik und b.  SDS loswerden
6. PolyWAX LP- für den Anionen-Austausch von Proteinen
7. PolySAX LP- für den Anionenaustausch von Peptiden, Proteinen und Oligonukleotiden

Warum sollte ich Säulen von PolyLC für die Bio-HPLC verwenden?

Dr. Andrew Alpert gründete PolyLC vor 30 Jahren in Columbia. Maryland, USA. Andrew ist weltweit als einer der führenden Biochromatographen auf diesem Gebiet bekannt. Zunächst einmal ist Andrew ein Pionier der Bio-HPLC. Darüber hinaus hat er auch das HILIC-Verfahren erfunden. Seltsamerweise wurde dieser Begriff später von vielen anderen Säulenherstellern kopiert. In den letzten Jahren leistete er auch Pionierarbeit bei der revolutionären ERLIC-Methode.

Bessere Alternativen zu Umkehrphasensäulen!

PolyLC für die Bio-HPLC stellt eine hervorragende Alternative zur Umkehrphasen-HPLC von Proteinen, Peptiden und anderen Biomolekülen dar. Die Liganden auf der PolyLC-Silica sind Polyasparaginsäure, die kovalent an Silica gebunden ist. Professionelle Chromatographen verdünnen ihr Fachwissen und haben eine starke Affinität zu PolyLC-Produkten. Poly(asparaginsäure)-modifizierte Oberflächen sind ein Eldorado für die Erstellung hochwertiger Chromatogramme.

Häufig gestellte Fragen zu PolyLC für Bio-HPLC

1) Warum kann ich für Proteine keine Umkehrphasen-HPLC verwenden?

Die Retention eines gelösten Stoffes spiegelt die Anzahl der Stellen wider, an denen er mit der stationären Phase wechselwirkt. Proteine enthalten eine Vielzahl hydrophober Reste. Daher lassen sich viele von ihnen nicht ohne weiteres desorbieren. Die Peaks können extrem breit sein, wenn sie überhaupt eluieren.

2) Muss ich mobile Phasen entgasen?

Nur wenn Sie einen Gradienten aus organischen Lösungsmitteln in Wasser durchführen wollen. Bei der Ionenaustausch- oder hydrophoben Interaktionschromatographie ist dies nicht erforderlich. In der Literatur der Gerätehersteller wird im Allgemeinen davon ausgegangen, dass ihre Geräte nur für RPC verwendet werden.

3) Wie sollte ich Säulen lagern?

Wenn Sie vorhaben, sie innerhalb von ein oder zwei Tagen zu verwenden, können Sie sie häufig in der mobilen Startphase belassen, sofern diese keine > 20 mM Salz enthält. Verschließen Sie einfach die Enden. Wenn sie > 20 mM Salz enthält, spülen Sie sie vor der Lagerung mit Wasser.
Wenn Sie es jedoch nach mehreren Tagen, aber innerhalb von zwei Wochen verwenden wollen, sollten Sie es auf jeden Fall mit Wasser spülen.
Wenn Sie die Säule nicht innerhalb von zwei Wochen verwenden, spülen Sie sie mit Wasser und anschließend mit einer Mischung aus ACN und Wasser (beliebiges Verhältnis zwischen 50:50 und 80:20) und lagern Sie sie mit verschlossenen Enden im Kühlschrank. Wenn die Säule anschließend aus der Lagerung genommen wird, sollte sie erneut konditioniert werden, als wäre sie neu (im Allgemeinen mit einem Hochsalzpuffer).

4) Wie bereitet man eine überwiegend organische mobile Phase richtig vor?

Stellen Sie den pH-Wert ein und filtern Sie den wässrigen Salzanteil vor der Zugabe des organischen Lösungsmittels, dann gießen Sie die wässrige Lösung in einen Messkolben. Geben Sie das organische Lösungsmittel bis auf einige ml an die Eichmarke heran. Schwenken Sie 8-9x um und lassen Sie die Lösung Raumtemperatur annehmen. Im Falle von Alkohol bedeutet dies, dass sie abkühlen muss. Im Falle von ACN bedeutet dies, dass sie sich erwärmt (die Mischung von ACN und Wasser ist endotherm). Die Erwärmung kann beschleunigt werden, indem der Kolben in ein Schallbad mit warmem Wasser gestellt wird. Dadurch wird die Lösung auch entgast.

Sobald der Inhalt Raumtemperatur erreicht hat, wird mehr organisches Lösungsmittel bis zur Eichmarke zugegeben und 8-9x umgedreht. Flüssigkeiten dehnen sich bei Erwärmung aus und ziehen sich bei Abkühlung zusammen. Das oben beschriebene Verfahren stellt sicher, dass Ihre Lösung reproduzierbar ist.

5) Warum werden meine Peptide nicht auf der PolySULFOETHYL A™-Säule zurückgehalten?

a) Ihr Probenlösungsmittel oder die mobile Startphase enthält TFA oder HFBA. Verwenden Sie stattdessen 5-10 mM K2HPO4, 0,1% Ameisensäure oder 0,1% Essigsäure.
b) Die Salzkonzentration ist > 30 mM. Verdünnen oder dialysieren Sie Ihre Probe.
c) Sie haben einen tryptischen Verdau bei pH 8 durchgeführt und den pH-Wert nicht auf 2,7-3,0 eingestellt. Dies lässt sich leichter bewerkstelligen, wenn Sie NH4HCO3 als Trypsinierungspuffer anstelle von Tris verwenden. HINWEIS: Wenn Sie einen SpeedVac®* verwenden, müssen Sie die Probe 3x hintereinander trocknen, um überschüssiges NH4HCO3 loszuwerden.
d) Sie haben eine iTRAQ®-Derivatisierung durchgeführt und den pH-Wert nicht auf 2,7-3,0 eingestellt und nicht ausreichend entsalzt.
e) Sie haben die Säule um mehr als das 6-fache der empfohlenen maximalen Beladungsgrenze überladen.

6) Kann ich TFA oder HFBA in der mobilen Phase verwenden, wenn ich PolyLC für Bio HPLC verwende?

Mit den Materialien, die PolyLC herstellt, ist dies im Allgemeinen keine gute Idee.

7) Meine Peaks sind in der HILIC stark verzerrt oder gespalten. Warum ist das so?

a) Die Probe enthält weniger organisches Lösungsmittel als die mobile Phase.
b) Wenn der gelöste Stoff ein hohes Ladung-zu-Masse-Verhältnis hat (z. B. Arginin), dann sollte das Lösungsmittel der Probe das gleiche Gegenion liefern wie die mobile Phase, um sich mit den geladenen Gruppen des gelösten Stoffes zu verbinden.
c) Wenn der gelöste Stoff ein extrem hohes Ladung-zu-Masse-Verhältnis aufweist (z. B. ATP; Aminoglykosid-Antibiotika), kann es erforderlich sein, 125 mM Salz in beiden mobilen Phasen zu verwenden oder einen ansteigenden Salzgradienten zu fahren.
Markennamen

PolyGlycoplex A™, PolySULFOETHYL A™, PolyCAT A™, PolyWAX LP™ und PolyHYDROXYETHYL A™ sind Marken
*** Übersetzt mit www.DeepL.com/Translator (kostenlose Version) ***

Why should I use columns from PolyLC for Bio HPLC?

Dr Andrew Alpert founded PolyLC 30 years ago in Columbia. Maryland USA. Indeed Andrew is worldwide known as one of the foremost Bio chromatographer in the field. For a start Andrew is a pioneer in Bio HPLC. Furthermore, he also invented the HILIC process. Strangely, the term was copied later-on by many other column manufacturer. He also pioneered the revolutionary ERLIC Method in the past few years.

Better alternatives to Reverse Phase  columns!

PolyLC  for Bio HPLC manufactur an excellent alternative to Reverse Phase HPLC of Proteins, Peptides and other Biomolecules. The ligands on the PolyLC silica are Polyasparticacid covalently attached to silica. Professional chromatographers are thin-slicing their expertice and have a strong affinity to PolyLC products. Poly(asparticacid) modified surfaces is an eldorado for creating high quality chromatogram.

Product range comprises

PolyCAT A for Cation-Exchange of Proteins
PolyGLYCOPLEX A for HILIC of Complex Carbohydrates
PolyHYDROXYETHYL A – for HIC and SEC HPLC
PolyMETHYL, ETHYL abd PROPYL A for HIC of Proteins and Peptides
PolySULFOETHYL A – for Cation-Exchange of Peptides
PolyWAX LP for Anion-Exchange of Proteins and Nucleic Acids

Frequently Asked Questions about PolyLC for Bio-HPLC

1) Why can’t I use reversed-phase HPLC for proteins?

  • Retention of a solute reflects the number of sites at which it interacts with the stationary phase. Proteins contain a lot of hydrophobic residues. Therefore, many of them do not desorb readily. Peaks may be extremely broad if they elute at all.

2) Do I need to degas mobile phases?

  • Only if you plan to run a gradient of organic solvent in water. It is not necessary to do so in ion-exchange or hydrophobic interaction chromatography. Literature from instrument companies generally assumes that their machines will be used only for RPC.

3) How should I store columns?

  • If you plan to use it within a day or two, you can frequently leave it in the starting mobile phase if it doesn’t contain > 20 mM salt. Just plug the ends. If it does contain > 20 mM salt, flush it with water before storage.
  • However, if you plan to use it after several days but within two weeks, you should definitely flush it with water.
  • Finally, if you aren’t going to use it within two weeks, flush it with water, then a mixture of ACN:water (any ratio between 50:50 and 80:20) and store in the refrigerator with the ends plugged. When this column is subsequently taken out of storage, it should be conditioned again as if it were new (generally with a high-salt buffer).

4) What’s the correct way to prepare a mostly organic mobile phase?

  • Adjust the pH and filter the aqueous salt portion prior to adding the organic solvent, then pour the aqueous solution into a volumetric flask. Add the organic solvent to within several ml of the calibration mark. Invert 8-9x and allow the solution to reach room temperature. In the case of alcohol, this means to cool. In the case of ACN, this means to warm up (mixing of ACN and water is endothermic). The warming can be accelerated by putting the vol. flask in a sonicator bath containing warm water. This also degasses the solution.

    Once the contents have reached room temperature, add more organic solvent to the calibration mark and invert 8-9x. Liquids expand when heated and contract when cooled. The above procedure insures that your solution will be reproducible.

5) Why aren’t my peptides retained on PolySULFOETHYL A™ column?

  • a) Your sample solvent or starting mobile phase contains TFA or HFBA. Use 5-10 mM K2HPO4, 0.1% formic acid, or 0.1% acetic acid instead.
  • b) The salt concentration is > 30 mM. Dilute or dialyze your sample.
  • c) You performed a tryptic digestion at pH 8 and haven’t adjusted the pH to 2.7-3.0. It’s easier to do this if you use NH4HCO3 as the trypsinization buffer instead of Tris. NOTE: If using a SpeedVac®*, it is necessary to take a sample to dryness 3x in succession in order to get rid of excess NH4HCO3.
  • d) You performed an iTRAQ® derivatization and didn’t adjust the pH to 2.7-3.0 and desalt adequately.
  • e) You overloaded the column by more than 6x the recommended maximum loading limit.

6) Can I use TFA or HFBA in the mobile phase using PolyLC for Bio HPLC?

  • This is generally a bad idea with the materials that PolyLC makes.

7) My peaks are badly skewed or split in HILIC. Why?

  • a) The sample contains less organic solvent than does the mobile phase.
  • b) If the solute has a high charge-to-mass ratio (e.g., arginine), then the sample solvent should supply the same counterion that the mobile phase does to pair with the charged groups in the solute.
  • c) If the solute has an extremely high charge-to-mass ratio (e.g., ATP; aminoglycoside antibiotics), then it may be necessary to use 125 mM salt in both mobile phases or to run an increasing salt gradient.

Trade Marks

PolyGlycoplex A™ PolySULFOETHYL A™ , PolyCAT A™, PolyWAX LP™, and PolyHYDROXYETHYL A™ are trademarks of PolyLC Inc. All Rights Reserved
SpeedVac® is a trademark of Savant Corp.
*ICAT® and iTRAQ® are trademarks of Applied Biosystems Inc., a branch of Applera Corp.

Trademarks for Poly LC coated Silica products

Javelin® Guard CartridgesSDS Removal (under construction)
SPE Cartridges (under construction)
TopTips™/NuTips™much faster and convenient than PAGE gels for purification of the double-stranded
DNA products from PCR reaction